Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976
Хроматография белков
Хроматография белков на колонке с катионообменной целлюлозой
Фракционирование белков сыворотки крови на колонке с фосфоцеллюлозой
А. Подготовка колонки. Соответствующее количество фосфоцеллюлозы (Ф-целлюлозы) сначала с помощью декантации трижды отмывают дистиллированной водой, а затем последовательно: 0,5 М NaOH, дистиллированной водой, 0,1 М Н3РО4, дистиллированной водой и стартовым буферным раствором. Отмывание дистиллированной водой всегда продолжают до тех пор, пока pH надосадочной жидкости не достигнет pH воды. Окончательное уравновешивание лонообменника стартовым буферным раствором производят уже в колонке.
Б. Хроматография. На колонку размером 1x50 см пипеткой осторожно наносят 2 мл сыворотки, диализованной в течение суток против стартового буферного раствора. После того как нанесенная сыворотка войдет в Ф-целлюлозу, ее остатки смывают тремя порциями буферного раствора по 2 мл. Фракционирование белков производят с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку следующие растворы: 0,02 М NaH2РО4 (стартовый буферный раствор), 0,04 М фосфатный буферный раствор pH 5,8, 0,05 М фосфатный буферный раствор pH 6,2, 0,06 М фосфатный буферный раствор pH 6,6, 0,1 М фосфатный буферный раствор pH 7,2, 0,1 М фосфатный буферный раствор+0,5 М NaCl pH 9,5.
Элюирование ведут со скоростью 50 мл/ч, элюат собирают фракциями по 5—6 мл. Регистрация оптической плотности раствора осуществляется с помощью автоматического прибора с самописцем, например “Увикорда” фирма LKB. Каждый новый элюирующий раствор подают только после того, как полностью выйдет пик, вымываемый предыдущим.